隨著生物醫(yī)藥的飛速發(fā)展，哺乳動物細(xì)胞已被廣fan用于重組蛋白、疫苗、kangai試劑及其他臨床相關(guān)的藥物的生產(chǎn)中。      

現(xiàn)有的哺乳動物表達(dá)系統(tǒng)包括中國倉鼠卵巢（CHO）細(xì)胞，嚙齒動物細(xì)胞系（ＮSO, BHK, SP2/0）和人類細(xì)胞系（ＨEK293細(xì)胞, PER.C6, CAP, 纖維瘤），其中CHO細(xì)胞和ＨEK293細(xì)胞占據(jù)重要地位。

本期主要簡述HEK293細(xì)胞的發(fā)展及蛋白表達(dá)系統(tǒng)的特點(diǎn)

1、HEK293細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)特點(diǎn)

（1）能在無血清的培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)，穩(wěn)定生長，大規(guī)模表達(dá)；

（2）轉(zhuǎn)染效率高；

（3）表達(dá)蛋白結(jié)構(gòu)z  接近其在人體內(nèi)構(gòu)象；

（4）在培養(yǎng)體系中能夠快速增長，高密度培養(yǎng)。

2、HEK293細(xì)胞的發(fā)展

HEK293細(xì)胞來源于人類胚胎腎細(xì)胞中。在人的胚胎腎細(xì)胞中轉(zhuǎn)入人5型腺病毒DNA pian段，得到的人胚腎細(xì)胞永生化細(xì)胞系即為HEK293細(xì)胞。

293T細(xì)胞

HEK293細(xì)胞中轉(zhuǎn)入SV40T-antigen基因形成的高轉(zhuǎn)衍生株成為293T細(xì)胞。含SV40ori的質(zhì)粒能夠在該細(xì)胞系中xianzhu擴(kuò)增，從而促進(jìn)表達(dá)載體的擴(kuò)增，促進(jìn)蛋白的表達(dá)，因此被廣泛應(yīng)用于逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)、基因表達(dá)和蛋白表達(dá)。在293T細(xì)胞中g(shù)ong轉(zhuǎn)染入pBND和pZAP質(zhì)粒，獲得的具有G418耐受的細(xì)胞系即為293T/17細(xì)胞系。該細(xì)胞系具有高轉(zhuǎn)染性的特點(diǎn)。轉(zhuǎn)入EBV基因則形成293T/17 SF細(xì)胞系，該細(xì)胞系主要用于細(xì)胞的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染及蛋白表達(dá)。

293H細(xì)胞

將HEK293細(xì)胞馴化后得到的能夠在無血清培養(yǎng)體系下快速生長、具有高轉(zhuǎn)染效率及高效蛋白表達(dá)性能的細(xì)胞系。該細(xì)胞系具有較好的貼附性，常用于噬菌斑檢測和蛋白的表達(dá)。例如293E細(xì)胞是在293-H細(xì)胞中插入EBNA-1基因的細(xì)胞系，該基因能夠穩(wěn)定表達(dá)EBV病毒的EBNA1蛋白。含有EBV復(fù)制起點(diǎn)（oriP）的重組表達(dá)質(zhì)粒，能夠在H293E細(xì)胞中復(fù)制，并實(shí)現(xiàn)蛋白的高效表達(dá)。而插入截短過后的EBNA-1基因得到293-6E細(xì)胞，該細(xì)胞能夠在無血清培養(yǎng)基中高表達(dá)生產(chǎn)蛋白及病毒載體。

293F細(xì)胞

能夠在無血清培養(yǎng)基中快速生長并高效表達(dá)蛋白的野生型293細(xì)胞系。在293F細(xì)胞中轉(zhuǎn)染pCMVSPORT6TAg.Neo 質(zhì)粒的得到293FT細(xì)胞，該細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)SV40大T抗原，并且促進(jìn)z  適病毒產(chǎn)物的產(chǎn)生，可用于高滴度慢病毒載體的生產(chǎn)。當(dāng)Flp-InTMT-RETM293細(xì)胞轉(zhuǎn)染了ecotropic receptor質(zhì)粒和MAPPIT(mammalian protein-protein interaction trap)報(bào)告質(zhì)粒稱為293FTM細(xì)胞，主要用于蛋白互作的篩選。

293S細(xì)胞

被馴化成能夠懸浮培養(yǎng)且能夠耐受低鈣離子培養(yǎng)條件的293細(xì)胞系。在293S細(xì)胞轉(zhuǎn)染pcDNA6/TR質(zhì)粒得到耐受bimadusu的細(xì)胞系即為293SG。該細(xì)胞系可用于四環(huán)素誘導(dǎo)的蛋白表達(dá)研究以及同源的N-糖基化蛋白的表達(dá)。293SGGD細(xì)胞則是在293SG轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-zeo-STendoT質(zhì)粒得到的細(xì)胞，其主要用于糖基化工程研究。

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